Центр клеточных и генных технологий | Институт молекулярной генетики
Список сотрудников
Кобылянский А.Г., рук.;
Лебедев С.Н., вед. инж.;
Антонов С.А., м.н.с.;
Марков Д.Д., м.н.с.;
Титкова И.А., инж.-иссл.
Основные направления исследований
- Получение новых генетически модифицированных линий стволовых клеток млекопитающих, изучение изменения их характеристик под действием генов и биологически активных веществ.
- Системная оценка биологических свойств лекарственных субстанций с использованием их влияния на дифференцировку, жизнеспособность и пролиферативную активность нормальных и генно-модифицированных эмбриональных стволовых клеток
- Разработка методики молекулярно-генетического исследования индивидуальных клеточных препаратов человека и животных с использованием технологии лазерной микродиссекции.
Центр клеточных и генных технологий (ЦКГТ) был создан в 1997 году как Центр коллективного пользования (ЦКП) для совместного использования научными подразделениями Института и другими профильными организациями уникального научного оборудования, находящегося в распоряжении ЦКГТ.
Деятельность ЦКГТ направлена на приобретение, освоение, обслуживание и повышение эффективности использования дорогостоящего оборудования с целью:
Деятельность ЦКГТ направлена на приобретение, освоение, обслуживание и повышение эффективности использования дорогостоящего оборудования с целью:
- повышения уровня фундаментальных и прикладных исследований в области клеточных и генных технологий;
- привлечения высококвалифицированного персонала к разработке и максимально широкому применению новых методов исследований при выполнении совместных научных и научно-технических проектов;
- выполнения совместных крупных научных и научно-технических проектов;
- подготовки высококвалифицированного персонала в ходе стажировок;
- обучения студентов и аспирантов и привлечения их к выполнению фундаментальных научных исследований;
- интеграции институтов РАН, высших учебных заведений и других заинтересованных организаций;
- расширения приборной базы, доступной сотрудникам ИМГ РАН, другим институтам и учебным учреждениям.
Задачи ЦКГТ:
- консолидация финансовых возможностей в плане приобретения оборудования и необходимых материалов для поддержания и развития ЦКП;
- расширение возможностей используемых методов и разработка новых;
- организация тесного сотрудничества, обмена опытом и обсуждение результатов работ, проводимых на базе ЦКП.
Основные достижения
Получены линии эмбриональных стволовых (ЭС) клеток мыши, стабильно трансфицированные плазмидными векторами, несущими ген фактора роста нервов человека (hNGF), ген зеленого флуоресцентного белка (eGFP) и ген trim14 под управлением промотора фактора элонгации (P EF1A). Проведен сравнительный анализ морфологии колоний, жизнеспособности и пролиферативной активности полученных трансгенных линий и клеток исходной линии R1. Проведено сравнение способности к формированию эмбриоидных тел и морфологии эмбриоидных тел клеток полученных трансгенных линий и клеток исходной линии R1. С помощью иммунофлуоресцентной микроскопии проведено сравнение экспрессии поверхностных маркеров CD15 и щелочной фосфатазы, характерных для недифференцированных ЭС клеток, в полученных трансгенных линиях и в клетках исходной линии. Из клеток линий R1-EFNGF, R1-EFGFP и R1, были получены культуры нейральных предшественников и нейронов, которые в дальнейшем могут быть использованы для создания тест-систем для скрининга биологически активных соединений. Проведено сравнение способности трансгенных линий ЭС клеток, несущих гены hNGF и eGFP к спонтанной дифференцировке в нейральные предшественники и нейроны в неселективной сывороточной среде. Показано влияние гена trim14 на начальные стадии дифференцировки ЭС клеток.
В ЦГКТ с использованием метода лазерной микродиссекции на установке Carl Zeiss PALM Combisystem была отработана методика анализа генотипов отдельных клеток в загрязненных и смешанных образцах в интересах судебно-медицинской экспертизы. Эти исследования показали, что:
- Метод лазерной микродиссекции позволяет получать необходимое количество индивидуального биологического материала для проведения генетических исследований.
- Препараты ДНК, полученные из клеточных объектов при помощи микродиссекции, пригодны для исследования аутосомной ДНК методом анализа полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.
- Совмещение специфического флуоресцентного окрашивания с микродиссекцией позволило значительно увеличить эффективность отбора и идентификацию материала.
В настоящие время решается проблема анализа единичных высокомолекулярных комплексов размером порядка 0,5 мкм, что близко к пределу возможностей современных методов микродиссекции.
В ЦКГТ проходили стажировку сотрудники и аспиранты Института молекулярной генетики и других родственных институтов и университетов по обучению работе с клеточными культурами, вирусной биоинженерии, методам РНК-интерференции и работе с культурами E. coli.
Основные публикации
- Е.В. Новосадова, Е.Л.Арсеньева, А.Н.Лебедев, А.Г. Кобылянский, Е.С.Мануилова, В.З.Тарантул, Н.В.Хайдарова, И.А.Гривенников, Влияние экспрессии гена pub человека на пролиферацию и дифференцировку клеток феохромоцитомы крысы линии РС-12. Нейрохимия том 28, № 1, 2011, стр. 78-82.
- И.А. Гривенников, О.В. Долотов, Л.С. Иноземцева, С.А. Антонов, А.Г. Кобылянский, Н.Ф. Мясоедов, Применение первичных культур нервных и глиальных клеток млекопитающих для отбора соединений с нейропротекторной активностью. Вестник биотехнологии Том 7, № 2, 2011, стр. 24-31.
- А.Г.Кобылянский, А.Н. Некрасов, В.И. Козлова, М.Ю. Сандин, Б.А. Алиханов, В.В. Демкин, Выявление новых эпитопов антител к филаггрину в молекуле белка филаггрина. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины том 151, № 5 2011, стр. 552.
- А.Г.Кобылянский, М. Ю. Сандин, В. И. Козлова, Б. А. Алиханов, В. В. Демкин. Определение антител к циклическому цитрулинированому пептиду при ревматоидном артрите. Клиническая лабораторная диагностика № 6, 2011, стр. 36-39.
- А.Г. Кобылянский, Кондаков А.В., Тищенков В.Г., Титов В.Н. Функциональные тесты в клинико-диагностической лаборатории; определение дефицита магния в тесте с нагрузкой. Клиническая лабораторная диагностика № 6 2012 г. стр. 16-20.
- Антонов С.А., Долотов О.В., Мануилова Е.С., Кобылянский А.Г., Костров С.В., Сафина Д.Р., Хайдарова Н.В., Гривенников И.А. Получение эмбриональных стволовых клеток мыши с индуцибельной экспрессией фактора роста нервов человека. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова Т 8, № 52, 2012, стр. 5-12.
- Кобылянский А.Г., Кондаков А.В., Тищенков В.Г., Титов В.Н. Дефицит магния: диагностические возможности нагрузочного теста. Международный сборник научных трудов, посвященный году Германии в России. Гуманитарные и естественные науки – устойчивому развитию общества (Земля наш общий дом). 2012 г., стр. 71-78.